Comparación de la detección y tipificación del virus del papiloma humano en muestras citológicas y de orina en pacientes del sexo femenino / Comparison of the detection and typing of human papilloma virus in cytological samples vs. urine samples in female patients

El cáncer de cuello uterino, es el segundo más frecuente en mujeres a nivel mundial; la infección por Virus de Papiloma Humano (VPH) de alto riesgo oncogénico, es el principal factor etiológico de esta malignidad. La identificación viral se logra mediante métodos moleculares sensibles y específicos como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que generalmente utiliza hisopados cervicales o biopsias como material biológico. Debido a las complicaciones e incomodidad que implica la toma de estas muestras, se realizan estudios en otras más accesibles como la orina. Por lo que se realizó la detección y tipificación de VPH en muestras de hisopados endocervicales y de orina, se compararon los resultados obtenidos y se evaluó la efectividad del uso de esta última. La extracción del material genético se realizó con el estuche comercial AXYGEN. Para la detección y la tipificación viral se empleó la técnica de PCR en tiempo final. La positividad para VPH fue 68,6% en los hisopados cervicales y 62,9% en las muestras de orina de, valores similares y comparables a estudios previos. Así mismo, la concordancia obtenida entre los resultados de las muestras empleadas respecto a los tipos virales identificados fue “moderada” (k=0,609), encontrándose además valores altos de sensibilidad y especificidad de 83,3% y de 81,8% respectivamente al usar muestras de orina. Estos resultados apuntan a la posibilidad de desarrollar un diagnóstico efectivo para VPH empleando muestras de orina, ya que reducirían la intervención de personal adiestrado para su toma, costos y la incomodidad para las pacientes.

Cervical cancer is the second most common cancer in women worldwide. Infection with high oncogenic risk Human Papillomavirus (HPV) is the main etiological factor of this malignancy. Viral identification is achieved by sensitive and specific molecular methods, such as polymerase chain reaction (PCR), which are generally used on cervical biopsies or swabs of biological material. Because of the complications and discomfort that taking these samples implies, studies are conducted with other samples obtained from less invasive methods, such as urine. Accordingly, detection and genotyping of HPV in endocervical swabs and urine were performed to compare results and to evaluate the effectiveness of using the latter samples. The genetic material was obtaining using the commercial kit Axygen. For viral detection and typing the conventional PCR technique was used. Positivity for HPV in cervical swabs was 68.6% and 62.9% in urine samples, similar values and comparable to previous studies. Likewise, the concordance obtained between the results of the samples used with respect to the identified viral types was “moderate” (k = 0.609), with high values of sensitivity and specificity of 83.3% and 81.8%, respectively, when urine samples were used. These results point to the possibility of developing an effective diagnosis for HPV using urine samples, because it would reduce the intervention of trained personnel, cost and discomfort for the patients.

ESTABLECIMIENTO DE UN SISTEMA DE SELECCIÓN IN VITRO DE VARIEDADES VENEZOLANAS DE ARROZ (Oryza sativa L.) RESISTENTES AL HONGO Pyricularia grisea / Establishment of an in vitro Selection of Venezuelan Cultivars of Rice (Oryza sativa L.) Resistant to the Fungus Pyricularia grisea

RESUMEN. El arroz, luego del trigo, es el cereal más importante del mundo, sin embargo, es susceptible al ataque de numerosos patógenos, siendo Pyricularia grisea, el más dañino. Este trabajo estableció un sistema de selección in vitro de variedades venezolanas a P. grisea, optimizando el sistema de regeneración por embriogénesis somática (inducción, regeneración y estrés por desecación), sometiendo el callo embriogénico (E) a presión de selección del filtrado crudo "FC" a través de cambios a la misma concentración "MC" o por incrementos progresivos en la concentración "IPC", obteniendo plantas tolerantes al fitopatógeno. El máximo porcentaje de inducción de callo embriogénico oscilo entre 30-65 %, en las cuatro variedades (Araure-4 y Venezuela 21: 1 mg.L-1 + 2 mg.L-1 K; Cimarrón: 3 mg.L-1 + 2 mg.L-1 K; Centauro: 1 mg.L-1 + 2 mg.L-1 BAP), mientras que la regeneración estuvo entre 44 y 52 % con 0.5 mg.L-1 + 2 mg.L-1 BAP a 48 h de desecación para Centauro y 24 h para las otras tres variedades. La frecuencia regenerativa de los callos E disminuyo a medida que se incrementó la concentración del FC, independientemente del método de presión selectiva. El promedio de plantas diferenciada por variedad, dependió del método de presión usado, siendo el sistema IPC (25 % para Centauro y 50 % para las otras tres variedades) el que mostro los resultados más favorables, evidenciándose que para las condiciones de los sistemas selectivos de FC evaluados, la resistencia expresada a nivel de planta in vivo no corresponde a la encontrada in vitro.

ABSTRACT. Rice after wheat is the most important cereal in the world, however, it is susceptible to attack by many pathogens, which Pyricularia grisea being the most harmful. In the current study we established an in-vitro selection system of P. grisea on Venezuelan rice varieties. A somatic embryogenesis regeneration system was optimized (induction, regeneration and desiccation) to expose embryogenic callus (E) to crude filtrate "CF" selection pressure through changes at the same concentration "SC" or progressive concentration increments " PIC "of P. grisea, and thus obtain plants tolerant to the pathogen. The maximum percentage of embryogenic callus induction ranged between 30-65 % in the four varieties (Araure-4 and Venezuela- 21: 1 mg.L-1 + 2 mg.L-1 K; Cimarron: 3 mg.L-1 mg.L-1 + 2 K; Centauro: 1 mg.L-1 + 2 mg.L-1 BAP) while regeneration was between 44 and 52 % with 0.5 mg.L-1 + 2 mg.L- 1 BAP 48 h of desiccation for Centauro and 24 h for the other three varieties. The regeneration frequency of embryogenic callus decreased as the concentration of FC increased, regardless of the method of selective pressure. The average differentiated plants per variety, depended on the pressure method used, with the PIC system being the most favorable (25 % for Centauro and 50 % for the other three varieties). The result demonstrated, to resistance expressed for plants in vivo does not correspond to the in vitro conditions

Prevalence of HPV and EBV infection andtheir relationship with the p53 and PCNA expression in oral carcinoma patients

Introduction: Infection caused by potentially oncogenic viruses, such as HPV and EBV, favors the role of certain oncoproteins that can induce dysplasias and malignant lesions. Objective: To evaluate the prevalence of HPV and EBV and their relation with the expression of p53 and PCNA in patients with oral carcinoma. Methodology: Twenty-seven oral squamous cell carcinomas (OSCC) were evaluated; DNA extraction was conducted using the QIAamp DNA mini kit; viral detection was obtained using the INNO-LiPA kit for HPV, and nested PCR was used for EBV. The evaluation of molecular markers was performed through immunohistochemical staining. Results: The mean age of the patients was 60.55 +/- 13.94 years, and 52 percent of these were female. Of the patients, 59 percent were tobacco users and 63 percent were alcohol consumers. HPV was detected in 70 percent of the patients with the predominance of genotype 16 (60 percent). As for EBV infection, it was observed in 59 percent of cases. p53 and PCNA immunopositivity corresponded to 44 percent and 59 percent, respectively. The tongue was the anatomical location with highest positivity for both viruses as well as for the expression of molecular markers. The 48 percent of the cases presented infection by both viruses. Conclusion: HPV and EBV infection together with the expression of p53 and PCNA were more frequently observed in advanced stages of the disease, suggesting a more relevant role in the progression than in tumor genesis.

Marcadores para el cribado del cáncer cervical

Los organismos producen sustancias, generalmente proteínas, cuya concentración y nivel de detección varía entre células sanas, células enfermas o afecciones benignas, los cuales son usados como marcadores de una patología dada, incluyendo el cáncer. Justamente, la importancia o valor de un marcador dado va a depender de la precisión de su uso a nivel clínico y de investigación, para el diagnóstico, pronóstico y estadifcación de la enfermedad, a tal punto que su detección puede ser fundamental para el establecimiento de una terapia o tratamiento a un paciente. A continuación, se presenta una revisión actualizada de los distintos marcadores utilizados en el cribado del cáncer uterino, incluyendo proteínas, ARN y cambios en secuencias de ADN, exponiendo sus ventajas y limitaciones.

Organisms produce substances, usually proteins, whose concentration and detection level varies between healthy cells, diseased cells or benign conditions, which are used as markers of a given pathology, including cancer. Precisely, the importance or value of a given marker will depend on the accuracy of their clinical and research use for the diagnosis, prognosis and staging of the disease. Thus, a marker detection may be central to the establishment of a therapy or treatment to a patient. Below a review is presented with an updated version of the various markers used in screening for uterine cancer, including proteins, RNA and DNA sequences changes, exposing their advantages and limitations.

Posible transmisión vertical de virus de papiloma humano en niños cuyas madres presentan antecedentes de infección viral

Objetivo: Detección y tipificación de virus de papiloma humano en muestras de niños cuyas madres tienen historia asociada al virus. Métodos: Estudio transversal y descriptivo. Se procesaron 66 hisopados perianales de niños con un promedio de edad de 18 meses atendidos en el Servicio de Dermatología del Hospital Universitario de Caracas. La detección viral se realizó mediante PCR con iniciadores genéricos MY11 y MY09; la tipificación de las muestras positivas en la detección se llevó a cabo mediante PCR múltiple. Resultados: Se obtuvo un porcentaje de positividad de 54,5 % y se identificó VPH de bajo riesgo oncogénico en 47,2 %, ADN viral de alto riesgo en 13,88 % e infecciones mixtas con tipos de alto y bajo riesgo oncogénico en 5,55 % de las muestras positivas. El 33,33 % de estas muestras no pudo ser tipificado con la metodología utilizada. Conclusiones: Aunque no se tienen datos del tipo viral en las madres para hacer comparaciones con los tipos identificados en los niños, estos resultados ponen en evidencia la posible transmisión vertical del VPH, considerando los antecedentes maternos, la corta edad de los niños y que la condición de abuso sexual fue descartada. Es recomendable hacer el seguimiento de la población estudiada con la incorporación de la evaluación de muestras obtenidas de los padres.

Objective: Detection and typing of Human Papillomavirus in samples of children whose mothers have a history associated with the virus. Methods: Transversal and descriptive study. Perianal swabs of 66 children with an average age of 18 months treated in the Service of Dermatology, University Hospital of Caracas, were processed. Viral detection was performed by PCR with MY11 and MY09 generic primers; typing of positive samples was performed by multiplex PCR. Results: A positive percentage of 54.5 % was obtained and low oncogenic risk HPV identified in 47.2 %, high-risk viral DNA in 13.88 % and mixed infections with types of high and low oncogenic risk in 5.55 % of the positive samples. 33.33 % of these samples could not be typed with the used methodology. Conclusions: Although the viral type is unknown in mothers to make comparisons with the types identified in children, these results highlight the possible vertical transmission of HPV, considering maternal history, the young age of the children and that the condition of sexual abuse was ruled out. It is recommended to monitor the studied population including the evaluation of samples obtained from the parents.

Human papillomavirus detection in head and neck squamous cell carcinoma.

INTRODUCTION: Human Papillomavirus (HPV) has been associated with benign and malignant lesions in different epitheliums. The relationship between specific genotypes of high-risk HPV and some human cancers is well established. The aim of this work was to detect the HPV genotypes present in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). METHODS: We evaluated 71 samples of patients with histopathological diagnosis of HNSCC. The DNA extraction was conducted with the QIAGEN commercial kit. HPV detection and genotyping were performed by reverse hybridisation (INNO-LiPA) following the commercial specifications. RESULTS: The mean age of the patients evaluated was 60.7 ± 13.11 years. The distribution of the lesions included 25 (35.20%) cases of squamous cell carcinoma (SCC) of the oral cavity, 23 (32.39%) of larynx, 16 (22.50%) of the oropharynx, 4 (5.63%) of paranasal sinus, and 2 (2. 80%) cases of SCC of the nostril. Of the patients, 78.9% were males, and of these 76% were tobacco users and 67.6% were alcohol consumers. The viral DNA was detected in 67.6% of the samples. The oral cavity and the larynx were the highest HPV-positivity sites with 35.40% and 29.10% respectively. The most frequent genotype was 16 as single infection (18.70%), or in combination with another HPV types. In the oral cavity and larynx the genotypes 16 or the combination 6 and 51 were present in 11.76% and 14.28%, respectively; and in the oropharynx the most frequent genotype was 16 in 22.50% of the cases, and in the paranasal sinus 50% presented infection with HPV-6. We observed that tumours with most advanced size and stage presented greater HPV positivity. CONCLUSIONS: This study shows a high percentage of HPV positivity in SCC is mainly associated with high-risk HPV. It is important to highlight that viral infection, especially HPV-16, could be a risk factor in HNSCC progression.

Detección del virus de papiloma humano en muestras de pacientes con ectropión cervical

Objetivo: Detección subclínica del virus de papiloma humano en muestras de pacientes diagnosticadas con ectropión cervical, para evaluar la prevalencia de la infección viral asociada a dicha condición. Métodos: El ADN fue extraído utilizando solventes orgánicos (fenol/cloroformo-alcohol isoamílico). La detección del virus de papiloma humano se realizó mediante PCR con iniciadores genéricos MY09/MY11 y para la tipificación de las muestras positivas se utilizó un kit comercial de PCR múltiple. Ambiente: Laboratorio de Genética Molecular-Instituto de Oncología y Hematología. Resultados: Se obtuvo una positividad de 26 % (13/50 muestras analizadas) para la presencia de ADN del virus de papiloma humano. De las muestras positivas, 38,45 % resultó virus de papiloma humano de alto riesgo oncogénico (tipo 16 o 18), mientras que otro 38,45 % correspondió a virus de papiloma humano de bajo riesgo (tipos 6, 11 o infección mixta 6/11) y 23,07 % no pudo ser tipificado con la metodología utilizada. Conclusión: Aunque este resultado no fue estadísticamente significativo, señala la necesidad de mayor seguimiento clínico de las pacientes positivas, especialmente aquellos casos correspondientes a virus de papiloma humano de alto riesgo oncogénico, ya que presentan mayor probabilidad de desarrollar cáncer cervical.

Objective: In this study was conducted subclinical human papillomavirus detection in samples from patients diagnosed with cervical ectropion to assess the prevalence of human papillomavirus infection associated with this condition. Methods: DNA was extracted with organic solvents (phenol /chloroform- isoamylic). Human papillomavirus detection was performed by PCR with generic primers MY09 and MY11 and the viral typing was performed using a commercial MPCR kit. Setting: Laboratorio de Genetica Molecular-Instituto de Oncologia y Hematologia; Results: The results showed that 26 % of the evaluated sample (13/50) was positive for the presence of human papillomavirus genome. Viral typing test identified high- oncogenic risk human papillomavirus (types 16 or 18) in 38.45.% of the positives cases. Likewise, 38.45 % was low oncogenic risk (types 6, 11 or mixed infection with 6/11 human papillomavirus) and 23.07 % could not be typified with the used methodology. Conclusions: Although this result is not statistically significant, the virus latent presence highlights the need for greater medical surveillance for positive patients, especially in cases where detected 16 and 18 high-risk oncogenic human papillomavirus types, because they may have increased risk of cervical cancer.

Extracción de ADN de muestras incluidas en parafina sin el uso de xilol para la detección y tipificación de VPH / DNA extraction from paraffin embedded samples without using xylene for HPV detection and typing

En el presente trabajo se llevó a cabo la extracción de ADN de biopsias cervicales con informe citológico de lesión intraepitelial cervical, incluidas en bloques de parafina, utilizando el “QIAamp DNA mini kit” (QIAGEN, Alemania) y la detección del Virus de Papiloma Humano (VPH). En el procedimiento original se eliminó la incubación en xilol, reduciendo los lavados del material biológico; la calidad de los ADNs extraídos fue probada mediante PCR para la detección del gen de la β-globina y del VPH, obteniéndose 84,3% y 28,1% de positividad, respectivamente. Estos resultados fueron comparables a los de otros trabajos similares y evidencian la obtención de ADN celular amplificable por PCR a partir de muestras parafinadas, que pudo ser utilizado eficientemente en procedimientos moleculares, eliminando la toxicidad del xilol y disminuyendo la manipulación del material biológico al reducir los lavados.

In the present study, DNA from cervical biopsies with a cytological report of intraepithelial cervical lesion and embedded in paraffin blocks was extracted using the “QIAamp DNA mini kit” (QIAGEN, Germany), and the Human Papyloma Virus (HPV) was detected. In the original procedure, the xylene incubation was eliminated, therefore reducing the washes of the biological material; the quality of the DNA extracted was tested by PCR for detecting the β-globine gene and HPV, with 84.3% and 28.1% positivity, respectively. These results were comparable to those of other similar studies, and they demonstrate that it is possible to obtain PCR amplifiable cellular DNA from paraffin embedded samples which can be used efficiently for molecular procedures, eliminating xylene toxicity, and decreasing the manipulation of the biological material by reducing washes.

Detección de ARN de virus hepatitis C en la saliva de un grupo de pacientes con hepatitis C crónica / Detection of hepatitis C virus RNA in saliva of a group of patients with chronic hepatitis C

La Hepatitis C constituye un problema de salud pública y su transmisión está claramente asociada con la ruta parenteral. Sin embargo su agente causal, Virus de Hepatitis C (VHC), también ha sido aislado de otros fluidos incluyendo la saliva, aunque la relación existente entre VHC y la patología bucal no está completamente dilucidada. El objetivo del presente estudio fue determinar la presencia de ARN-VHC en la saliva de pacientes con Hepatitis C crónica. En la presente investigación se evaluaron 24 pacientes provenientes del Departamento de Hepatología del Hospital Clínico Universitario, Universidad Central de Venezuela, con infección por VHC. 5 ml de saliva no estimulada fue tomada de cada paciente. ARN-VHC fue detectada por la técnica de Transcriptasa Reversa- Reacción en cadena de la Polimerasa (TR-RCP). En 29 por ciento, (7/24) pacientes VHC+, se observó la presencia de ARN-VHC en saliva. En este estudio, observamos la presencia de ARN-VHC en la saliva de pacientes con infección crónica por VHC. Es necesario realizar estudios epidemiológicos a gran escala, para clarificar el significado biológico de la presencia de este agente viral en la saliva, incluyendo la potencial vía de transmisión por la exposición con este fluido

Hepatitis C is a worldwide public health problem and its transmisión is clearly associated with the parenteral route, however, the virus has also been isolated from other body fluids, including saliva, although the relationship between HCV and oral pathology is not clearly understood. The aim of this study was to determine the presence of HCV-RNA in saliva from patients with chronic C hepatitis. In the present investigation 24 patients, attended at the Hepatology Department, at the the Clinical Hospital University, Central University of Venezuela, with HCV infection were evaluated . 5ml of unstimulated saliva were taken of each patient. Saliva HCV-RNA was detected by Polymerase Chain Reaction (PCR). 29 percent (7/24) of HCV+ patients showed HCV-RNA in saliva. In this study, we observed the presence of HCV-RNA in saliva of patients infected with HCV. Further large-scale epidemiological studies are required to clarify the clinical significance of HCV in the saliva, including the potencial for viral transmisión through exposure to these fluids

[Trypanosomatidae of public health importance occurring in wild and synanthropic animals of rural Venezuela]. / Trypanosomatidae de importancia en salud pública en animales silvestres y sinantrópicos en un area rural del municipio Tovar del estado Mérida, Venezuela.

INTRODUCTION: Chagas disease and leishmaniasis are important public health problems due to their high frequency and broad distribution in Latin America. Understanding of the roles of reservoir animals is crucial for a global assessment of the epidemiology of these diseases. OBJECTIVE: To identify parasites classed as Trypanosomatidae as they occurred in sylvatic animals, and to establish rates of coinfection. MATERIALS AND METHODS: Sylvatic animals were systematically captured in the rural area of El Carrizal, Merida State, Venezuela, betweenJuly, 1998 and February, 2000. The captures were made in Tomahawk type homemade traps, placed 15 nights per month throughout the study period. Blood was extracted from each captured and anesthetized animal by means of cardiac puncture. The search for trypanosomatids was undertaken by fresh blood examination, Giemsa stained blood smears and by means of blood-agar culture. Occasional xenodiagnoses were made to check diagnostic accuracy. The isolates obtained in culture media were identified by restriction fragment analysis and hybridization with specific probes. RESULTS: Three species of sylvatic animals (n = 215) were captured: Rattus spp. (135), Sigmodon hispidus (73) and Didelphis marsupialis (7). From them, three species of Trypanosomatidae were identified: Leishmania (Viannia) guyanensis, Trypanosoma cruzi and Trypanosoma lewisi. Trypanosoma. cruzi was identified in D. marsupialis (4/7), S. hispidus (1/73) and Rattus spp. (1/ 135), whereas L. (V.) guyanensis and T. lewisi were identified only in Rattus spp., 1/135 and 12/ 135, respectively. CONCLUSIONS: The coexistence of these genetically related hemoflagellates in sylvatic hosts was important for understanding the immunological interactions that may be established in reservoir animals, and the possible implications that this may have for the susceptible host. Finally, the identification of L. (V.) guyanensis in Rattus spp and T. cruzi in S. hispidus constituted the first reports of this relationship in Venezuela.

Trypanosomatidae de importancia en salud pública en animales silvestres y sinantrópicos en un área rural del municipio Tovar del estado Mérida, Venezuela / Trypanosomatidae of public health importance occurring in wild and synanthropic animals of rural Venezuela

Introducción. La enfermedad de Chagas y la leishmaniasis son patologías de gran importancia en salud pública debido a su alta frecuencia y amplia distribución en América Latina. El estudio de los animales reservorios es vital para una comprensión global de estas enfermedades. Objetivo. En el presente trabajo nos propusimos identificar parásitos de la familia Trypanosomatidae en animales silvestres con la finalidad de establecer posibles relaciones debidas a la coinfección. Materiales y métodos. En El Carrizal, un área rural del estado Mérida, Venezuela, entre julio de 1998 y febrero de 2000 se realizaron capturas sistemáticas de animales silvestres con la finalidad de poner en evidencia la presencia de parásitos pertenecientes a la familia Trypanosomatidae. Las capturas fueron realizadas con trampas caseras tipo Tomahawk, colocadas 15 noches por mes durante el periodo del estudio. A los animales capturados se les practicó punción cardiaca bajo anestesia para extracción de sangre con la cual se realizaron los siguientes estudios: examen en fresco, extendido para coloración con Giemsa y cultivo en agar-sangre. Se realizaron algunos xenodiagnósticos. Los aislamientos obtenidos por medio de cultivo se identificaron por medio de análisis de restricción e hibridación con sondas específicas. Resultados. Se capturaron y estudiaron 215 animales pertenecientes a tres especies: Rattus spp. (135), Sigmodon hispidus (73) y Didelphis marsupialis (7). Igualmente, se identificaron tres especies de Trypanosomatidae: Leishmania (V) guyanensis, Trypanosoma cruzi y Trypanosoma lewisi. Mientras T. cruzi fue identificado en D. marsupialis (4/7), S. hispidus(1/73) y Rattus spp. (1/135), L.(V) guyanensis y T. lewisi sólo se identificaron en Rattus spp. (1/135 y 12/135, respectivamente). Conclusión. El estudio de la coexistencia de estas diferentes especies de flagelados genéticamente relacionados nos parece de importancia por las interacciones inmunológicas que se pueden establecer en los animales reservorios y las posibles implicaciones que esto puede tener en el huésped susceptible. Finalmente, las identificaciones de L.(V) guyanensis y T. cruzi en Rattus spp. y S. hispidus, respectivamente, son las primeras reportadas en Venezuela.

Cotton rats (Sigmodon hispidus) and black rats (Rattus rattus) as possible reservoirs of Leishmania spp. in Lara State, Venezuela.

A total of 519 wild animals belonging to eleven species were collected during a two year study in a cutaneous leishmaniasis endemic area in Venezuela (La Matica, Lara State). The animals were captured in home-made Tomahawk-like traps baited with maize, bananas or other available local fruits, and parasites were isolated from 27 specimens. Two different species were found naturally infected with flagellates, i.e., cotton rats (Sigmodon hispidus) and black rats (Rattus rattus). Characterization of the parasites using PCR, kDNA restriction pattern and hybridization with species-specific probes revealed the presence of Leishmania (L.) mexicana in three of the black rats and Leishmania (V.) braziliensis in two others. The latter species was also identified in the single positive specimen of S. hispidus. The results suggested both species of animals as possible reservoirs of Leishmania sp.

Cotton rats (Sigmodon hispidus) and black rats (Rattus rattus) as possible reservoirs of Leishmania spp. in Lara State, Venezuela

A total of 519 wild animals belonging to eleven species were collected during a two year study in a cutaneous leishmaniasis endemic area in Venezuela (La Matica, Lara State). The animals were captured in home-made Tomahawk-like traps baited with maize, bananas or other available local fruits, and parasites were isolated from 27 specimens. Two different species were found naturally infected with flagellates, i.e., cotton rats (Sigmodon hispidus) and black rats (Rattus rattus). Characterization of the parasites using PCR, kDNA restriction pattern and hybridization with species-specific probes revealed the presence of Leishmania (L.) mexicana in three of the black rats and Leishmania (V.) braziliensis in two others. The latter species was also identified in the single positive specimen of S. hispidus. The results suggested both species of animals as possible reservoirs of Leishmania sp